MagaBio plus ウイルスDNA/RNA精製キットII

A1: (1) プライマー 人工合成プライマーが不適切な保存条件により分解していないか確認してください。プライマー設計が適切かどうか、BLASTを用いてプライマーの特異性を確認するか、プライマーを再設計してください。 (2) テンプレート 長期保存や繰り返しの凍結融解はテンプレートの切断、開環、または分解を引き起こす可能性があります。テンプレートには新しく調製したDNA二本鎖を使用してください。テンプレートのGC含量が高すぎると二本鎖DNAが開裂できなくなります。その場合はPCR Enhancer（製品番号 P021）を添加することで効果的に巻き戻し温度を下げることができます。テンプレートがcDNAの場合は、逆転写に使用したRNAの純度と完全性を確認する必要があります。 (3) 酵素 不適切な保存や輸送により反応に使用する酵素が失活している可能性があります。新しい酵素に交換するか、別の供給元の酵素で再実験することを推奨します。 (4) 増幅系 反応系の構成が正しくないため、再実験を推奨します。 (5) 反応プログラム 変性温度が正確か、またPCR装置の表示温度と実際の温度が一致しているか確認してください。温度が高すぎると最初の数サイクルで酵素が急速に失活し、一方温度が低すぎるとテンプレートの変性が不完全になります。アニーリング温度が適切でない場合は、アニーリング温度にグラジエントを設定し、適切なアニーリング温度を探索できます。プライマーのTm値に基づいてアニーリング温度を設定し、例えばプライマーTm値が72℃以上の場合はアニーリングステップを省き、直接伸長ステップ（2ステップPCR）に進むことができます。

A2: (1) プライマー 人工合成プライマーが分解していないか確認してください。 (2) テンプレート まずテンプレートの品質を確認してください。長期保存や繰り返しの凍結融解はテンプレートの切断、開環、または分解を引き起こす可能性があります。テンプレートには新しく調製したDNA二本鎖を使用してください。テンプレートが利用できない場合は、最初の増幅産物を倍数希釈して二次増幅のテンプレートとして使用できます。 (3) 反応プログラム タッチダウンプログラムを試すことができます。伸長時間を延長し、サイクル数を増やしてください。