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BioReady I 逆転写酵素

BioReady I 逆転写酵素

BioReady I 逆転写酵素は、大腸菌での組換え発現と多段階精製により得られた高純度逆転写酵素です。これはM-MLV(モロニーマウス白血病ウイルス)逆転写酵素の遺伝子工学的改変体です。本酵素は鋳型親和性が向上しており、低コピー遺伝子の逆転写に特に適しています。RNaseH活性を欠失しているため、長鎖の一本鎖cDNAの合成が可能です。さらに高い熱安定性を有し、高次構造をもつRNA鋳型の逆転写にも適しています。

詳細

製品説明

BioReady I Reverse Transcriptaseは、RNase H活性を低減し、熱安定性を向上させた改変型モロニーマウス白血病ウイルス(M-MLV)逆転写酵素です。従来のM-MLVよりも高い温度で、より高収量の第一鎖cDNAを合成するために使用できます。

製品特長

1. 低RNase H活性:第一鎖cDNA合成中のRNA分解を低減し、全長cDNAの収量が向上します。

2. 高い熱安定性:至適逆転写温度は42~50℃で、複雑な二次構造を持つRNAテンプレートに適しています。

3. 高純度:ヌクレアーゼ残存がなく、宿主ゲノムDNA残存量が低くなっています。

4. アプリケーション範囲:第一鎖cDNA合成、ワンステップRT-PCR。

アプリケーション事例

1. マウス肝臓から抽出した総RNAを10倍段階希釈し、逆転写を行いました。第一鎖cDNA産物の10分の1をテンプレートとし、BSB70プレミックスを用いて増幅し、HBB遺伝子の発現レベルを検出しました(プローブ法)。結果を下図に示します。

bioready-i-reverse-transcriptase-detail-2.jpg

結果:R²=0.9998であり、優れた直線性を示しています。この逆転写酵素は、10pgの総RNAを含む異なる濃度のテンプレートを効果的に逆転写でき、高い増幅効率を示します。

2. 異なる濃度のSARS-CoV-2 RNAをテンプレートとして、BioReady I逆転写酵素を使用したワンステップ逆転写増幅を行いました。N遺伝子、O遺伝子、E遺伝子、および内部標準の発現レベルを検出しました(プローブ法、4連複)。ワンステップ逆転写増幅の結果を、輸入メーカー(T)および国内メーカー(B)の類似試薬と比較しました。増幅の増加は比較メーカーの試薬よりも高く、Ct値は比較メーカーの試薬よりも早期でした。増幅結果を下表に示します。

bioready-i-reverse-transcriptase-detail-3.jpg

結果:BioReady I逆転写酵素は、ブランドTおよびブランドBの試薬と比較して優れた逆転写効率を持つことが示されました。

保管条件

1. キットは凍結状態で輸送してください。

2. キットの保管:-20℃の冷蔵庫で遮光して保管し、反復凍結融解は5回を超えないようにしてください。

3. 有効期間:12か月、有効期間内に使用してください。