COVID-19抗原検査キット（コロイド金法）

A1: (1) プライマー 人工合成プライマーが不適切な保存条件により劣化していないか確認する。プライマー設計が適切かどうか、BLASTを用いてプライマーの特異性を確認するか、プライマーを再設計する。(2) テンプレート 長期保存や凍結融解の繰り返しにより、テンプレートの切断、環状構造の開裂、または分解が起こり得る。テンプレートには新たに調製したDNA二本鎖を使用すること。テンプレートのGC含量が高すぎると、二本鎖DNAの開裂が困難になる。この場合、PCRエンハンサー（製品番号P021）を添加することで、巻き戻し温度を効果的に下げることができる。テンプレートがcDNAである場合、逆転写に使用したRNAの純度と完全性を確認する必要がある。(3) 酵素 反応に使用した酵素が不適切な保存や輸送により失活している。新しい酵素に交換するか、別の供給元の酵素で再実験することを推奨する。(4) 増幅系 反応系の調製が誤っているため、再実験を推奨する。(5) 反応プログラム 変性温度が正確か、PCR装置の表示温度と実際の温度が一致しているか確認する。温度が高すぎると、最初の数サイクルで酵素が急速に失活し、温度が低すぎるとテンプレートの変性が不完全になる。アニーリング温度が適切でない場合は、アニーリング温度にグラジエントを設定し、適切な温度を探索することができる。プライマーのTm値に基づいてアニーリング温度を設定し、例えばプライマーのTm値が72℃以上の場合は、アニーリングステップを省き、直接伸長ステップ（2ステップPCR）を実施することも可能。

A2: (1) プライマー 人工合成プライマーが劣化していないか確認する。(2) テンプレート まずテンプレートの品質を確認する。長期保存や凍結融解の繰り返しにより、テンプレートの切断、環状構造の開裂、または分解が起こり得る。テンプレートには新たに調製したDNA二本鎖を使用すること。テンプレートが入手できない場合は、初回増幅産物を段階希釈し、二次増幅のテンプレートとして使用する。(3) 反応プログラム タッチダウンプログラムを試すことができる。伸長時間を延長し、サイクル数を増やす。