単純ヘルペスウイルス1型および2型核酸型鑑別検出キット（蛍光PCR法）

A1: (1) プライマー 合成プライマーが不適切な保存条件により分解していないか確認してください。プライマー設計が適切かどうか、BLASTを用いてプライマーの特異性を確認するか、プライマーを再設計してください。 (2) 鋳型 長期保存や繰り返しの凍結融解は鋳型の切断、開環、または分解を引き起こす可能性があります。鋳型としては新たに調製したDNA二本鎖を使用する必要があります。鋳型のGC含量が高すぎると二本鎖DNAが開裂できなくなります。この場合、PCRエンハンサー（品番P021）を添加することで効果的に融解温度を下げることができます。鋳型がcDNAの場合、逆転写に使用したRNAの純度と完全性を確認する必要があります。 (3) 酵素 反応に使用する酵素が不適切な保存や輸送により失活している場合があります。新しい酵素に交換するか、別の供給元の酵素で再実験することをお勧めします。 (4) 増幅系 反応系の調製が誤っている可能性があります。実験を繰り返すことをお勧めします。 (5) 反応プログラム 変性温度が正確かどうか、PCR装置の表示温度と実際の温度が一致しているか確認してください。温度が高すぎると最初の数サイクルで酵素が急速に失活し、温度が低すぎると鋳型の変性が不完全になります。アニーリング温度が適切でない場合は、アニーリング温度に勾配を設定し、至適アニーリング温度を探索してください。プライマーTm値に基づいてアニーリング温度を設定します。例えば、プライマーTm値が72℃以上の場合は、アニーリングステップを省き、直接後続の伸長ステップ（2ステップPCR）を行うことができます。

A2: (1) プライマー 合成プライマーが分解していないか確認してください。 (2) 鋳型 まず鋳型の品質を確認してください。長期保存や繰り返しの凍結融解は鋳型の切断、開環、または分解を引き起こす可能性があります。鋳型としては新たに調製したDNA二本鎖を使用する必要があります。鋳型が入手できない場合は、最初の増幅産物を段階希釈し、二次増幅の鋳型として使用できます。 (3) 反応プログラム タッチダウンプログラムを試すことができます。伸長時間を延長し、サイクル数を増やしてください。