詳細
製品の特長
1. 本キットでは、HPV-26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82、40、42、43、44、54、61、67、69、70、71、72、81、83との交差反応はありません。
2. ヒトゲノム、ウレアプラズマ・ウレアリティカム、クラミジア・トラコマティス、単純ヘルペスウイルスII型、ヒトサイトメガロウイルス、梅毒トレポネーマ、マイコプラズマ・ホミニス、淋菌、カンジダ・アルビカンス、膣トリコモナス、黄色ブドウ球菌、B型肝炎ウイルス、C型肝炎ウイルスとの交差反応は認められませんでした。
3. 同時に、ヘモグロビン、白血球、子宮頸管粘液、膣用避妊薬、女性用衛生用品、膣抗真菌薬、膣潤滑剤の存在は、検体の検査に影響を与えませんでした。
製品説明
HPV (6/11/16/18) ジェノタイピング リアルタイムPCRキットは、蛍光プローブを用いたin vitroリアルタイムPCR法に基づいています。HPVゲノムのL1遺伝子に合わせて設計されたプライマーと配列特異的蛍光プローブを使用します。HPV 18のプローブは5'末端にFAM標識、HPV 16のプローブは5'末端にHEX標識、HPV 6のプローブは5'末端にROX標識、HPV 11のプローブは5'末端にCy5.5標識されたオリゴヌクレオチドです。また、ヒトβ-グロビン遺伝子に基づく特異的プライマーおよびプローブを内部リファレンスとして開発し、レポーターとして5'末端にCy5を標識しています。すべてのプローブの3'末端にはクエンチャーが付加されています。PCR過程で、プローブが標的DNAにハイブリダイズすると、DNAポリメラーゼがプローブの5'末端を切断し、レポーター色素とクエンチャー色素が分離されます。この切断により、切断されたレポーター色素による蛍光シグナルが発生し、PCR検出システムによってリアルタイムにモニタリングされます。リアルタイムでの蛍光強度のモニタリングにより、検体中のHPV (6/11/16/18) の定性的検出が可能です。
応用分野
HPV (6/11/16/18) ジェノタイピング
保存条件
検体は採取後、できるだけ速やかに処理することを推奨します。直ちに処理しない場合は、2-8℃で最大24時間保存してください。処理が遅れる場合は、-70℃以下で保存してください。検体の凍結融解を繰り返さないでください。
注文情報

よくあるご質問
A1: (1)プライマー 人工合成されたプライマーが不適切な保存条件により分解していないか確認します。プライマー設計が適切かどうか、BLASTを用いてプライマーの特異性を確認するか、プライマーを再設計します。(2)テンプレート 長期保存や繰り返しの凍結融解はテンプレートの切断、開環、分解の原因となります。新たに調製したDNA二本鎖をテンプレートとして使用してください。テンプレートのGC含量が高すぎると二本鎖DNAが開裂できなくなります。その場合はPCR Enhancer(品番 P021)を添加することで効果的に巻き戻し温度を下げることができます。テンプレートがcDNAの場合は、逆転写に使用したRNAの純度と完全性を確認する必要があります。(3)酵素 反応に使用した酵素が不適切な保存や輸送により失活している可能性があります。新しい酵素に交換するか、別の供給元の酵素で再実験することを推奨します。(4)増幅系 反応系の調製が正しくない可能性があるため、再実験を推奨します。(5)反応プログラム 変性温度が正確か、PCR装置の表示温度と実際の温度が一致しているか確認します。温度が高すぎると最初の数サイクルで酵素が急速に失活し、低すぎるとテンプレートの変性が不完全になります。アニーリング温度が適切でない場合は、グラジエントを設定して最適なアニーリング温度を探索します。プライマーのTm値に基づいてアニーリング温度を設定します。例えば、プライマーのTm値が72℃以上の場合は、アニーリングステップを省略し、その後の伸長ステップに直接進むことができます(2ステップPCR)。
仕様
| 検体種別 | 子宮頸部スワブ |
|---|---|
| 感度 | 500コピー/mL |
| 精度 | 蛍光干渉がなく、他の病原体との交差反応なし |
| 検出能 | 同一反応チューブ内でHPV-6、11、16、18の4種のウイルス核酸を検出可能 |
| 検出時間 | 1時間以内 |
| 対応機器 | Bioerの蛍光定量検出システム、LineGene 9600 Plus (FQD-96A) および QuantGene 9600 (FQD-96C) |

